При стандартом содержании разбавление 3.5 (высушенный образец разбавляется в 500мкл h2o)

При высоком содержании алминокислот, например каллусный материал. Разбавление осуществляется в 7.5 раз. (Высушенный образец с пробоподготовки разбавляется в 1.5 мл H2O)

Калибровочный раствор готовится из концентрата аминокислоты. 50мкл на 950мкл h2o

Анализ капель
254 нм. 22кв.

Фенольные соединения

Реактивы: Na2CO3 20% (разводится без танцев с бубном)
Галловая к-та 0.02 г к 1мл 96% этанола (светочувствителен) (на шейкер)
Реактив Фолена-Чокалтеу в холодильнике (светочувствителен)
1.  К навеске в 0.1 г добавить 1 куб 96% этилового спирта. Взболтать
2.  Инкубация в течение 12 часов в холодильнике.
3.  След день. 1 куб H2O деионизированной.
4.  Шейкер 30 минут.
5.  Центрифугирование 10 минут 10.000-15.000 rpm.
6.  Отбор супернатанта в 1.5 кубовые пробирки
7.  В 2 кубовую пробирку добавить 1680мкл H2O
8.  Добавить 20 мкл супернатанта
9.  100 мкл реактива Фолена-Чокалтеу
10.  200 мкл 20% Na2CO3
11.  Выдержать 30 минут в темноте при комнатной t
12.  Калибровка по Галловой кислоте 0.02 г к 1мл 96% этанола.
13.  Измерение при 760 нм.
Калибровка
  Р-р Галловой к-ты  Этанол 96%
А  4 мг/мл  200 мкл сток  800 мкл
B  2 мг/мл  500 A  500 мкл
C  1 мг/мл  500 B  500 мкл
D  0.5 мг/мл  500 C  500 мкл
E  0.25 мг/мл  500 D  500 мкл
F  0.1 мг/мл  400 E  600 мкл
G  0.05 мг/мл  500 F  500 мкл
H  0.025 мг/мл  500 G  500 мкл
I  0 мг/мл  0  1000 мкл

Флавоноиды

Реактивы:
10% AlCl3 - 10u 100мл h20
1M CH3COONa - 13.6 г CH3COONA на 100 мл H20
0.02 г квертицина на 2 мл этанола (10мг/мл квертицина)
Калибровка   Раствор кверцетина  96% этанол
А  200 мкг/мл  40 мкл  980 мкл
B  100 мкг/мл  20 мкл 0.02мл  980 мкл
C  50 мкг/мл  500 мкл A  500 мкл
D  25 мкг/мл  500 мкл B  500 мкл
E  12.5 мкг/мл  500 мкл C  500 мкл
F  5 мкг/мл  200 мкл D  800 мкл
G  2.5 мкг/мл  500 мкл E  500 мкл
H  1 мкг/мл  200 мкл F  800 мкл
I  0 мкг/мл  0  1000 мкл

1.  К 0.1 г навески добавить 2мл этанола 96%
2.  Инкубация на ночь в холодильнике
3.  200 мкл экстракта + 600 мкл этанола + 40 мкл 1М CH3COONa + 1120 мкл (H2O)
4.  В темноту при комнатной температуре на 30 минут
5. Измерение на 415 нм.

Пигменты

К 0.01г навеске добавляется 1куб 100% ацентона и 2 железных шарика.
Гомогенизатор в течение 1 минуты при 41 попугае.
Шейкер +4с 10 мин 1000 rpm.
Центрифуга +4 с 10 мин при 10000 rpm.
Отбор супернатанта (500мкл) в 1.5 кубовые пробирки.
Добавить в пробирку с осадком 1куб 100% ацетона
Повторить 2 раза
Измерение на НаноДропе при длине волны в 662, 645 и 470 нм при 100% ацетоне.
663, 646 и 470 нм для 80% ацетона.

Сахара и крахмал

2х 2 кубовые пробирки для сахара и крахмала
1х 2 кубовые для калибровки
Антроновый реагент: 0.1г антрона смешивается со 100мл 98% серной кислоты. Отстаивается в течение часа. Приготовление в день анализа.
Глюкоза для калибровки. 0.05г растворяется в 1000мкл дистиллята.
Навеска в 0.1г экстрагируется в 2 мл 80% этанола 15 минут при 80с
Центрифуга обычная 10 минут при 10000 rpm.
Cупернатант отбирается в стеклянные прбирки. Осадок экстрагиурется спиртом еще два раза. Супернатант соединяется с предыдущими фракциями.(экстракт для определения сахара)
100 мкл спиртового экстракта упаривается до сухого состояния.
Осадок растворяется в 100 мкл дистиллята.
————————————————————————————————————————————
К осадку после последней экстракции добавляется 2мл 1% Серной к-ты и инкубируется при 90с в течение 30 минут.
Центрифуга 10000 rpm при 10 min
Супернатант переносится в чистые пробирки(Крахмальный экстракт)
————————————————————————————————————————————
В новые пробирки для сахаров и крахмала добавляется 20 мкл раствора, 480 мкл дистиллята и 1.5 мл антронового реагента.
Калибровка по калибровочному раствору глюкозы 20 мкл, 480 мкл дистиллята и 1.5 мл антронового реагента.
Концентрация   Глюкоза  Вода
А 500мг/мл  0.05  1000 мкл
В 200мг/мл  400 мкл р-ра А  600 мкл
С 100мг/мл  500 мкл р-ра В  500 мкл
D 50 мг/мл  500 мкл р-ра С  500 мкл
E 25 мг/мл  500 мкл р-ра D  500 мкл