•0.2 мМ аскорбиновой кислоты

Сток 100мМ - 35.2 мг на 2мл H2O
Из стока 28 мкл на 10 мл буфера

Кумасси на 50 мл
1. К 0.005 г кумасси добавить 2.5 мл 90% спирта (растворить)
2. Добавить 5мл 85%  H3PO4 (под вытяжкой- это кислота)
3.Довести до 50 мл
Хранится месяц. Использовать через сутки после приготовления. Перед использованием разбавить в 2 раза необходимый объем.

Альбумин для калибровки
25 мг/мл: 0.05г в 2 мл буфера.

Пробоподготовка
1. 0.1 г образца добавить 300 мкл экстракционного буфера.
2. 5 минут шейкер холод (+4С°)
3.Центрифуга 10 минут на холоде 12000 rpm(+4С°)
4. Перенос супернатанта в чистые пробирки.
5. К осадку добавить 300 мкл/200мкл/100мкл в зависимости от вязкости.
Число оборотов 13000/15000/15000
Повтор 3 раза
6. Можно оставить на ночь супернатант в холодильнике.
6.1 Центрифуга 5 минут 15000 rpm

Измерение концентрации белка
Каждый образец в трёх повторах.
1.960 мкл 50мМ K Na фосфатного буфера
2.40 мкл экстракта белка.
3. 1000 мкл кумасси
Измерять при 595 нм.

ППО

Реактивы
50мМ Na-фосфатный буфер (pH 6.5)
50мМ пирокатехин (опасен, растворяется хорошо)

Приготовление
5мл пирокатехина - 0.0275г
10мл пирокатехина - 0.0550г
20мл пирокатехина - 0.1г
25мл пирокатехина - 0.1376г
50мл пирокатехина - 0.2753г
Накладывать пинцетом куски
(В противогазе)

Анализ
1. К 40 мкл белкового экстракта добавить 1960 мкл 50мМ катехола в Na фосфатном буфере.
2. Инкубация при 37С° в течение часа.
Контроль 1960 мкл катехола в фосфатном буфере + 40 мкл H2O

Измерить при 420 нм.

Пероксидаза по Бояркину

Реагенты
0. Бенизидин солянокислый(не растворяется нормально)(опасен)
1. 0.25% раствор солянокислого бензидина.
На 100 мл  250 мг бензидина + 2мл CH3COOH(уксусная кислота) довести до 100 мл H2O. Или
250 мг бензидина растворить в 100 мл 0.2М Na-ацетатного буфера.
2. 0.3% перекись

Анализ
1.К 20 мкл белкового экстракта добавить 980 мкл 0.2 М Na-ацетатного буфера.
2. Добавить 500мкл 0.25% раствора солянокислого бензидина.

Измерение при 590 нм 2 минуты. Инициация реакции путем введения 500мкл 0.3% H2O2.

Гваяколовя пероксидаза

Реактивы
1. Гваякол (опасен)
2. 50мМ раствор K/Na фосфатный буфер. pH 7.4
3.H2O2 0.3% (сток банка 3%)

Анализ
1. На 50 мл - 44.9 мкл гваякола + 1мл спирта, довести до 50 мл буфером.
2. К 40 мкл экстракта добавить 1860 мкл реакционной смеси + буфер, добавить 100мкл 0.3% H2O2
3. Инкубация при 37 С° 30 минут.

Измерение
Длина волны 470 нм. Контроль вместо экстракта вода.

Аминокислоты

Электролит готовится из двух растворов
1. 0.2 М двенадцативодный гидрофосфат натрия 3.582 на 50мл.
(Растворяется на бане, мудовый)
Хранится при комнатке, иначе развалится.
2. 0.2 М моногидрат однозамещённый фосфат натрия 1.38 на 50 мл.
Хранится при комнатке
3. Аминокислоты 0.05г растворяются в 50мл H2O".
[Можно приготовить микс, если совсем нечем заняться в жизни и есть крышечки от водки. 2.5 куба каждой АМК довести до 50мл H2O"]
Полученные разведения так же дериватизируются, как и образцы. (После разведения сухого остатка в 500мкл H2O" и подготовки концентрата. Из него отбирается 50мкл и смешивается с 950 мкл H2O'' - калибровочный раствор.
Электролит
0.1135г b циклодекстрина + 3000 мкл гидрофосфата натрия + 750 мкл дигидрофосфата натрия в 25мл h2o''
(Растворяется на бане)
Реакционные растворы
1. 0.1 М Na2CO3 0.715 г в 25 мл h2o
2. N-фенилизотиционат 200мкл + 12мл изопропилового спирта. (Взболтать)

Пробоподготовка
1.Навеска массой 0.2г + 2 шарика + 1500 мкл 20% спирта.
2. Гомогенезируется
3. Центрифугуется.
4. Отбирается супернатант (1000мкл)
5. К супернатанту (1000 мкл) добавляется 100мкл Na2CO3 и 300мкл фенилизоцианата в изопропиловом спирте.
6. Вортекс.
7. 35 минут при комнатной t.
8. Перенос в чашечки для сушки, полного объема эппендорфа.
9. Сушка 35-40 С в печке. 2 суток как минимум.
10. Сухой осадок соскабливают и разбавляют в 500мкл H2O".
11. Помещают на Вортекс, затем центрифугуют.
[В разбавленном состоянии деградирует.]